如何才能用好安捷倫色譜柱這件事確實(shí)值得好好學(xué)習(xí)

　　安捷倫色譜柱的正確使用和維護(hù)非常重要，稍有不慎就會(huì)降低色譜柱效率，縮短使用壽命，甚至損壞色譜柱。在色譜操作過程中，為了維護(hù)色譜柱，需要注意以下幾個(gè)問題。

　　

　　1、避免壓力和溫度的急劇變化以及任何機(jī)械振動(dòng)。溫度的突然變化或色譜柱從高處墜落都會(huì)影響柱內(nèi)的填充情況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)對(duì)柱內(nèi)的填料產(chǎn)生沖擊，因此應(yīng)緩慢調(diào)節(jié)流速，進(jìn)樣時(shí)閥門轉(zhuǎn)動(dòng)不宜過慢。

　　

　　2、溶劑的組成應(yīng)逐漸改變，尤其是反相色譜。不應(yīng)直接由有機(jī)溶劑改為全水，反之亦然。

　　

　　3、一般來說，色譜柱不能反沖。只有在生產(chǎn)廠家表明可以反沖的情況下，才能通過反沖去除殘留在柱頭的雜質(zhì)。否則，反沖會(huì)迅速降低柱效。

　　

　　4、選擇使用合適的流動(dòng)相（尤其是pH），避免破壞固定相。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱。分析柱為鍵合硅膠時(shí)，前置柱為硅膠，可以使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱前被硅膠“飽和”，避免硅膠基質(zhì)在分析柱中溶解。
 

　　

　　5、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品，尤其是生物樣品直接注入色譜柱。需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接保護(hù)柱。保護(hù)柱通常是填充有類似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

　　

　　6、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑清洗色譜柱，以除去柱內(nèi)殘留的雜質(zhì)。清洗時(shí)，對(duì)流路徑系統(tǒng)中流動(dòng)相的更換應(yīng)逐漸用可混溶的溶劑轉(zhuǎn)移，每個(gè)流動(dòng)相的體積應(yīng)為柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。

　　

　　7、色譜柱存放時(shí)，用乙腈或甲醇填充色譜柱，并擰緊色譜柱接頭，防止溶劑揮發(fā)干燥。不要將緩沖溶液留在柱子中過夜或更長(zhǎng)時(shí)間。

　　

　　8、色譜柱在使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)過濾器堵塞。此時(shí)應(yīng)更換或拆下過濾器進(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱子，污染柱頭；如果柱效降低或色譜峰變形，柱頭可能會(huì)塌陷，死體積可能會(huì)增加。

　　

　　一般安捷倫色譜柱在正確使用的情況下，使用壽命可達(dá)2年以上。硅膠基填料只能在ph2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時(shí)間后，一些吸附力強(qiáng)的物質(zhì)可能會(huì)殘留在柱子頂部，尤其是一些有色物質(zhì)更容易被看到吸附在柱子頂部的填料上。新色譜柱使用一段時(shí)間后，柱頂填料可能會(huì)塌陷，降低柱效。這時(shí)也可以加入填料來恢復(fù)柱效。

　　

　　安捷倫色譜柱每次工作后，最好用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液清洗。例如，ODS柱應(yīng)用甲醇清洗至基線平衡。當(dāng)使用鹽緩沖溶液作為流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)在使用后用無鹽流動(dòng)相清洗。含有鹵素（氟、氯、溴）的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道，不應(yīng)長(zhǎng)時(shí)間接觸。如果安裝在HPLC儀器上的色譜柱不經(jīng)常使用，應(yīng)每4-5天打開并清洗15分鐘。